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脐血干细胞的保存 婴儿出生后,留在脐带及胎盘内的血就是脐带血。自古以来,这些血被当成废物丢弃,目前采集脐带血的方式是:婴儿出生后,脐带接扎,剪断,婴儿由助产护士、擦洗、包裹、护理的同时,既可从脐带血(体内采集),也可待胎盘娩出后再采集(体外采集)。两种方法采集量均可在80ml 左右。
脐血采集不会对婴儿和母体造成任何不利影响,只是将原来作为废弃物的脐血收集下来。但应注意的一点是,采集后的脐血应于 24 小时之内进行处理,运送过程中应避免紫外线照射及剧烈震荡,以充分保持细胞的活性。保存者应在产前提前与医院及脐血库联络,以保证脐血的及时、顺利采集。
冷冻保护液的添加用 1640培养液将无菌的保护液 (DMS〇 )配 成 20 % 浓 度 ,取与胎肝悬液等体积的2 0 % D M S O , 缓慢加人细胞悬液中,室温静置 10min ,再将样品放入降温仪中。程序降温法:多采用两步或三步降温法,即 开 始 时 从 室 温 以 降 温 ,降至- 3 0 ℃时 ,恒 温 2m i n 后 改 为 5——7℃ /m i n 降至-80℃或- 9 0℃ , 再转入液氮中 ( - 1 9 6 ℃ ) 长期保存。也有人主张开始降温速度应严格控制在1-3℃ /min,但经过相变(-11—15℃)热释放之后即可加速降温速度,余下各阶段对细胞存活影响不大。
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膜蛋白介导的细胞间的相互作用有些信号是通过细胞-细胞的直接接触起作用的。β-Catenin就是一种介导细胞粘附连接的结构成分。除此之外,穿膜蛋白Notch及其配体Delta或Jagged也对干有重要影响。在果蝇的感觉器官前体细胞,脊椎动物的胚胎及成年组织包括视网膜神经上皮、骨骼肌和血液系统中,Notch信号都起着重要的作用。当Notch与其配体结合时,干细胞进行非分化性增殖;当Notch活性被抑制时,干细胞进入分化程序,发育为功能细胞。
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非程控降温深低温保存法下面介绍几种不同保护液组方的保存方法:保 护 液 配 方 :2 0 % D M S O ,1 2 % 右旋糖軒 (dextmn,Sigma 公司),生理氯化钠溶液。在冰水浴中,将浓缩的有核细胞加入等体积的低温保护液 (D M S O 终 浓 度 为 10%),混 匀 ,置-80℃冰箱存放 4 h ,再置液氮中保存,有核细胞终浓度为 (2.34±2.06)xl09 个/L (马庆 2003)。
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