原代培养细胞
脐带血有哪些用途?
脐带血中的造血干细胞可以用来治疗多种血液系统疾病和免疫系统疾病,包括血液系统恶性肿瘤(如急性白血病、慢性白血病、多发性骨髓瘤、淋巴瘤等)、骨髓增殖异常综合征、血红蛋白病(如海洋性贫血)、骨髓造血功能衰竭(如再生障碍性贫血)、先天性代谢性疾病、先天性免疫缺陷疾患、自身免疫性疾患、某些实体肿瘤(如小细胞肺癌、神经母细胞瘤、卵巢癌等)。
干细胞重建胰岛功能糖尿病的病因比较复杂,通俗地讲是胰岛细胞罢工或者怠工,使得分泌胰岛素减少,或者是胰岛素的作用减弱,不能有效地降低血糖。针对病因想要治疗糖尿病,就需要修复和增加健康的胰岛细胞。利用干细胞重建胰岛功能,就是通过干细胞的自我复制能力和分化成多种功能细胞的特性,使干成胰岛细胞,修复损伤的胰岛细胞,并促进再生,促进胰岛素的分泌,靶向修复胰岛素抵抗,提高胰岛素敏感性,从而重建胰岛功能,达到降糖降脂,减轻和阻止并发症的发生。
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米 用 6 % (质量分数) 轻乙基淀粉(h e s , 平均相对分子质量 480 000, H e s p a n , D u p o n ,美国) 沉降后一次离心方法去除大多数红细胞及大部分血浆。具体方法:每份脐带血按体 积 比 1 : 4 的比例加入脐带血内,充 分 混 勻 ,垂 直 倒 置 悬 挂 ,使红细胞自然沉降20〜 3 0 m i n , 直至红细胞界面下降时,去除红细胞。再将富含有核细胞的血裝在 1〇℃ 4 00g 离 心 l O m i n , 沉降有核细胞。用血浆积压器去除部分血浆。体 积 为 30——40ml。以上操作均在采集袋中操作 。
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脐带血直接保存作者所在实验室从医院取回的脐带血未经处理直接加入等体积的保护液,液氮保存取得较好的效果。程控降温深低温保存法保护液配方: 2 0 % 二甲基亚砜(D M S O , Sigma 公司), 8 0 % T C E 。在冰水浴中,将浓缩的有核细胞加入等体积的低温保护液 (D M S O 终 浓 度 为 10%),混 勻 ,样品放入 D W 微机降温仪中,以 代 /m i n 的速度降温至-40℃ ,然 后 以 5T /m i n 的速度降温至- 8 0 ℃ 后取出,置液氮中保存,有核细胞终浓度为 (2.34±2.06)xl09 个/L。
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