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干细胞被医学界称为“万能细胞”,通俗的讲,干细胞就像是生命的种子,是一种可以自我更新和再生的多功能细胞。在一定的诱导条件下,可以分化成多种功能细胞,具有修复各种组织功能和再生器官的能力。
干细胞是人类重要的生物资源,近年来,干细胞作为新兴的医疗技术发展迅速,对多种疾病的干预治疗效果显著。
目前国内的干细胞治疗需在具有细胞临床应用资质的细胞工程单位,一些三甲医院也有干细胞治疗临床应用转化项目。
20世纪末以来,以干细胞技术为依托的干细胞治疗,成为小分子化学药、大分子蛋白药后的,第三次药物革。
近些年,在国内有关细胞治疗的报道已经屡见不鲜,以国家层面为主导,各地方大力推动,干细胞产业医学研究和应用迈入了快速发展的阶段。
目前正在开展的干细胞治疗临床试验涉及上百种疾病,包括脊髓损伤、脑中风、渐冻症、老年痴呆症、骨关节炎、帕金森、肝硬化、系统性红斑狼疮以及卵巢早衰等等。
除内源性调控外,干细胞的分化还可受到其周围组织及细胞外基质等外源性因素的影响。 分泌因子 间质细胞能够分泌许多因子,维持干细胞的增殖,分化和存活。有两类因子在不同组织甚至不同种属中 成体干细胞在体内发育为不同组织都发挥重要作用,它们是TGFβ家族和Wnt信号通路。比如TGF家族中至少有两个成员能够调节神经嵴干细胞的分化。近研究发现,胶质细胞衍生的神经营养因子(GDNF)不仅能够促进多种神经元的存活和分化,还对精原细胞的再生和分化有决定作用。GDNF缺失的小鼠表现为干细胞数量的减少,而GDNF的过度表达导致未分化的精原细胞的累积[3]。Wnts的作用机制是通过阻止β-Catenin分解从而Tcf/Lef介导的转录,促进干细胞的分化。比如在线虫卵裂球的分裂中,邻近细胞导的Wnt信号通路能够控制纺锤体的起始和内胚层的分化。 膜蛋白介导的细胞间的相互作用 有些信号是通过细胞-细胞的直接接触起作用的。β-Catenin就是一种介导细胞粘附连接的结构成分。除此之外,穿膜蛋白Notch及其配体Delta或Jagged也对干有重要影响。在果蝇的感觉器官前体细胞,脊椎动物的胚胎及成年组织包括视网膜神经上皮、骨骼肌和血液系统中,Notch信号都起着重要的作用。当Notch与其配体结合时,干细胞进行非分化性增殖;当Notch活性被抑制时,干细胞进入分化程序,发育为功能细胞。 整合素(Integrin)与细胞外基质 整合素家族是介导干细胞与细胞外基质粘附的主要的分子。整合素与其配体的相互作用为干细胞的非分化增殖提供了适当的微环境。比如当β1整合素丧失功能时,上皮干细胞逃脱了微环境的制约,分化成角质细胞。此外细胞外基质通过调节β1整合素的表达和,从而影响干细胞的分布和分化方向。
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冷冻保护液的添加用 1640培养液将无菌的保护液 (DMS〇 )配 成 20 % 浓 度 ,取与胎肝悬液等体积的2 0 % D M S O , 缓慢加人细胞悬液中,室温静置 10min ,再将样品放入降温仪中。程序降温法:多采用两步或三步降温法,即 开 始 时 从 室 温 以 降 温 ,降至- 3 0 ℃时 ,恒 温 2m i n 后 改 为 5——7℃ /m i n 降至-80℃或- 9 0℃ , 再转入液氮中 ( - 1 9 6 ℃ ) 长期保存。也有人主张开始降温速度应严格控制在1-3℃ /min,但经过相变(-11—15℃)热释放之后即可加速降温速度,余下各阶段对细胞存活影响不大。
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由于保存方法的不同,复温的形式有多种。从液氮中取出样品,在 37——42℃水浴下复温,时间不超过 5 min。过滤脐带血,将其置入过的输液瓶里,封 口 ,待患者使用。取出样品复温,水浴温度控制在4 1 ℃ ,每份脐血均可在2m i n 内冻融。加入等体积的 5 % 白蛋白和 10% L M D 混合液,混匀平衡 5 min 后离心去 D M S O , 再 用 L M D 调细胞悬液。
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