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脐血干细胞的保存 婴儿出生后,留在脐带及胎盘内的血就是脐带血。自古以来,这些血被当成废物丢弃,目前采集脐带血的方式是:婴儿出生后,脐带接扎,剪断,婴儿由助产护士、擦洗、包裹、护理的同时,既可从脐带血(体内采集),也可待胎盘娩出后再采集(体外采集)。两种方法采集量均可在80ml 左右。
脐血采集不会对婴儿和母体造成任何不利影响,只是将原来作为废弃物的脐血收集下来。但应注意的一点是,采集后的脐血应于 24 小时之内进行处理,运送过程中应避免紫外线照射及剧烈震荡,以充分保持细胞的活性。保存者应在产前提前与医院及脐血库联络,以保证脐血的及时、顺利采集。
目前外周血造血干细胞体外保存主要有两种方法 : -196℃ 程控降温液氮冻存和- 8 0 ℃ 直接保存方法。其中前者以其能长期保存而且细胞损失少作为经典方法在国内外广泛应用(Almid 1997, Broxmeyer 1997),但缺点是操作复杂,仪器设备昂贵。 - 8 0℃ 直接冻存的方法是从2 0 世 纪 8 0 年代发展起来的,其优点是操作简便,费用低而实用,但用该方法进行长期造血干细胞保存研究报告较少,故目前认为-80℃ 直接冻存适用于较短时间的造血干细胞冻存。冷冻保护液是影响冻存效果的关键之一。
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骨髓应在手术室内行无菌操作。患者在麻或全麻下,用骨髓穿刺针在前、后进行多处穿刺抽取骨髓。抽取骨髓用的注射器应肝素化,控制每毫升骨髓的肝素量为20——40单 位 ,以防形成凝集。外周血造血干细胞的低温保存方法恶 性 血 液 病 患 者 采 用 C M O P 化 疗 联 合 rhG-C S F (每日l〇ng/kg)动 员 ,白细胞升至5xl09 个/L 以上时,采 用 C S -3000 P L U S 血 细 胞 分 离 机 采 集 P B S C ,处理血循环总量7000——16 OOOml(根据患者情况设定),总 产 品 55——60 ml。
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干细胞的可塑性越来越多的据表明,当成体干细胞被移植入受体中,它们表现出很强的可塑性。通常情况下,供体的干细胞在受体中分化为与其组织来源一致的细胞。而在某些情况下干细胞的分化并不遵循这种规律。1999年Goodell等人分离出小鼠的肌肉干细胞,体外培养5天后,与少量的骨髓间质细胞一起移植入接受致死量辐射的小鼠中,结果发现肌肉干细胞会分化为各种血细胞系。这种现象被称为干细胞的横向分化(trans-differentiation)。关于横向分化的调控机制目前还不清楚。大多数观点认为干细胞的分化与微环境密切相关。可能的机制是,干细胞进入新的微环境后,对分化信号的反应受到周围正在进行分化的细胞的影响,从而对新的微环境中的调节信号做出反应。 克隆猪、克隆羊,其技术的机制原理和干细胞是一致的。
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