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脐带血干细胞移植的优点相较于骨髓、外周血干细胞移植等传统的干细胞移植方法,脐带血干细胞移植具有以下优点:
①脐带血中的干细胞浓度及纯度较高,是骨髓干细胞的10—20倍,其增殖能力也远超骨髓干细胞;
②来源方便,新生儿出生时即可收集脐带血;
③治疗费用低、移植准备时间短,尤其适用于病情不稳定、发展迅速的患者;
④脐带血干细胞移植对配型要求的严格程度低于骨髓干细胞移植,所以配型成功率较高;
⑤脐带血淋巴细胞大多数为初始型细胞,其免疫效应分子和受体表达不够完善,因此免疫功能较不成熟,排斥反应发生率较低;
⑥脐带血受胎盘屏障的保护,细胞自身传染病感染率较低;
⑦相较于胚胎干细胞移植来说,脐带血干细胞移植不存在伦理问题。
骨髓应在手术室内行无菌操作。患者在麻或全麻下,用骨髓穿刺针在前、后进行多处穿刺抽取骨髓。抽取骨髓用的注射器应肝素化,控制每毫升骨髓的肝素量为20——40单 位 ,以防形成凝集。外周血造血干细胞的低温保存方法恶 性 血 液 病 患 者 采 用 C M O P 化 疗 联 合 rhG-C S F (每日l〇ng/kg)动 员 ,白细胞升至5xl09 个/L 以上时,采 用 C S -3000 P L U S 血 细 胞 分 离 机 采 集 P B S C ,处理血循环总量7000——16 OOOml(根据患者情况设定),总 产 品 55——60 ml。
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转录因子的调控在脊椎动物中,转录因子对干的调节重要。比如在胚胎干细胞的发生中,转录因子Oct4是的。Oct4是一种哺乳动物早期胚胎细胞表达的转录因子,它导表达的靶基因产物是FGF-4等生长因子,能够通过生长因子的旁分泌作用调节干细胞以及周围滋养层的进一步分化。Oct4缺失突变的胚胎只能发育到囊胚期,其内部细胞不能发育成内层细胞团 [1]。另外白血病抑制因子(LIF)对培养的小鼠ES细胞的自我更新有促进作用,而对人的成体干细胞无作用,说明不同种属间的转录调控是不一致的。又如Tcf/Lef转录因子家族对上皮干细胞的分化重要。Tcf/Lef是Wnt信号通路的中间介质,当与β-Catenin形成转录复合物后,促使角质细胞转化为多能状态并分化为毛囊。
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P B S C 与回输:冻存物自液氮中取出后立即放入42℃水浴箱中,融化后立即回输给患者。细胞活力测定:将待测样本分别于冷冻保存前与复苏后Oh、 3 h 、 6 h 采用台盼蓝拒染法检测细胞存活率(吕 秀 荣 2 0 0 4)。这是没有速控条件下的冷冻方法,简单,易重复操作。但是由于这种降温方式在降温的过程中降温速度不恒定,冷冻保护液选择和其对细胞回收率的影响备受重视。Stiff报道了以6 % 羟乙基淀粉 (H E S )、5 % D M S O 及 4 % 人血清白蛋白(A L B )混合物作为冷冻保护液,用非程控降温将骨髓细胞置于- 8 0 ℃冻存的方法。 Halle等(2004)采 用 1 %H A S + 3 . 5 % H E S + 2 . 5 % D M S O 。张俊萍等将D M S O 、 H E S 、 A L B 和 H A S 按不同比例组成冷冻保护液,发 现 5 % D M S O + 6 % H E S +H A S 效果好。范华骅等研制的C P 8 0 低温保护 液 含 7.5% 右旋糖酐、 6.25% D M S O 和 6.25% A L B ,与样品混合后D M S O 浓 度 为 5 % 。
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