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脐带血干细胞及其移植脐带血中含有多种类型的干细胞,主要包括造血干细胞(HSCs))、间充质干细胞(MSCs)和内皮祖细胞(EPCs))等。其中,造血干细胞和间充质干细胞在脐带血中含量较多。
造血干细胞可分化为所有类型的血细胞;间充质干细胞在一定条件下进行体外培养和诱导可以向神经、成骨、软骨、脂肪、肌腱、肌肉和心肌等细胞方向分化,两者均已广泛应用于临床干细胞移植研究。
肌肉干细胞(muscle stem cell)可发育分化为成肌细胞(myoblasts),后者可互相融合成为多核的肌纤维,形成骨骼肌基本的结构。编辑本段基础应用干细胞的调控是指给出适当的因子条件,对干细胞的增值和分化进行调控,使之向指定的方向发展。干细胞自身有许多调控因子可对外界信号起反应从而调节其增殖和分化,包括调节细胞不对称分裂的蛋 人体胚胎干细胞白,控制基因表达的核因子等。另外,干细胞在终末分化之前所进行的分裂次数也受到细胞内调控因子的制约。 细胞内蛋白对干细胞分裂的调控 干细胞分裂可能产生新的干细胞或分化的功能细胞。这种分化的不对称是由于细胞本身成分的不均等分配和周围环境的作用造成的。细胞的结构蛋白,是细胞骨架成分对细胞的发育重要。如在果蝇卵巢中,调控干细胞不对称分裂的是一种称为收缩体的细胞器,包含有许多调节蛋白,如膜收缩蛋白和细胞周期素A。收缩体与纺锤体的结合决定了干细胞分裂的部位,从而把维持干细胞性状所的成分保留在子代干细胞中。 转录因子的调控 在脊椎动物中,转录因子对干的调节重要。比如在胚胎干细胞的发生中,转录因子Oct4是的。Oct4是一种哺乳动物早期胚胎细胞表达的转录因子,它导表达的靶基因产物是FGF-4等生长因子,能够通过生长因子的旁分泌作用调节干细胞以及周围滋养层的进一步分化。Oct4缺失突变的胚胎只能发育到囊胚期,其内部细胞不能发育成内层细胞团 。另外白血病抑制因子(LIF)对培养的小鼠ES细胞的自我更新有促进作用,而对人的成体干细胞无作用,说明不同种属间的转录调控是不一致的。又如Tcf/Lef转录因子家族对上皮干细胞的分化重要。Tcf/Lef是Wnt信号通路的中间介质,当与β-Catenin形成转录复合物后,促使角质细胞转化为多能状态并分化为毛囊。
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也有选用单一冷冻保护液的。 Galmes等(1995)首先提出以10% D M S O 为保护液,细胞冷冻后储存于-80℃的方法。 Hemandez-Navarro等 以 10% D M S O 和 H A S 混合物为冷冻保护液,将 装 有 P B S C 的冷冻袋放入9 5 % 甲醇液中,直接置于-80°C 保存,细胞回输后造血恢复情况与其他方法无明显差异。叶韵斌等(2000)对 使 用 10% D M S O 单一保护液和 5 % D M S O + 6 % H E S + 4 % A L B 混合保护液的效果进行比较,发现在冻存180天以内二者差异不大,细胞活力在8 5 % 以上, C D 34+阳性细胞比例、粒单集落数均维持治疗水平。
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首先,细胞储存需要严格的技术流程和制备技术,因此符合规范的流程体系是一项重要的考核,如果没达标,很可能造成样本损毁或是交叉。其次,存储机构所掌握的核心技术也重要,根据储存数量和种类的要求,其技术水平也会成倍提升。如果技术不过关,很可能出现复苏后细胞数量、质量不达标,无法使用的情况,耽误后续治疗。重要的一点是,该机构是否拥有干细胞应用转化的能力,其制备的干细胞制剂能否为相关医院应用。
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