干细胞与再生医学湖南省工程研究中心
脐带血干细胞及其移植脐带血中含有多种类型的干细胞,主要包括造血干细胞(HSCs))、间充质干细胞(MSCs)和内皮祖细胞(EPCs))等。其中,造血干细胞和间充质干细胞在脐带血中含量较多。
造血干细胞可分化为所有类型的血细胞;间充质干细胞在一定条件下进行体外培养和诱导可以向神经、成骨、软骨、脂肪、肌腱、肌肉和心肌等细胞方向分化,两者均已广泛应用于临床干细胞移植研究。
胎肝细胞悬液的制备人胎肝取至水囊引产或剖腹产的4〜6个月正常胎儿。在无菌条件下从腹腔取出胎肝,同时从心脏取血查胎儿血型。剔除粘连在肝脏表面的结缔组织和胆囊后,将肝脏置于培养皿中剪成小组织块,然后投入装有双层不锈钢(内层孔径为 1 0 0 目,外 层 为 1 8 0 目/in2(lin2=6.451600xl0-4 m 2))的小烧杯。用少量培养液或生理盐水(经细胞培养,热原试验均为阴性),将组织块冲洗2〜 3 次 ,弃去洗涤液,然后倒入20 ml P R M I 1640培养液,并用注射器针芯在钢网内将组织块研磨,如此 重 复 3 次 ,即可取出胎肝中大部分的造血干细胞。将合并收集的细胞悬液通过4 号的注射器制成单细胞悬液。
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由于保存方法的不同,复温的形式有多种。从液氮中取出样品,在 37——42℃水浴下复温,时间不超过 5 min。过滤脐带血,将其置入过的输液瓶里,封 口 ,待患者使用。取出样品复温,水浴温度控制在4 1 ℃ ,每份脐血均可在2m i n 内冻融。加入等体积的 5 % 白蛋白和 10% L M D 混合液,混匀平衡 5 min 后离心去 D M S O , 再 用 L M D 调细胞悬液。
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国内的干细胞储存。 “生命银行”是一种形象的比喻,将充满健康活性的“生命种子”——干细胞,通过高科技手段地保存下来,以备未来为自身或家人治疗重大疾病提供医疗资源的“生命健康储存”方式。国内的干细胞储存存储场所 “生命银行”的外在形式或场所是干细胞库新生儿类:脐带间充质干细胞、胎盘亚全能干细胞、羊膜多能干细胞、胎盘造血干细胞;类:脂肪干细胞、成年女性宫内膜(经血)干细胞、牙髓干细胞、免疫细胞。
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