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脐带血干细胞及其移植脐带血中含有多种类型的干细胞,主要包括造血干细胞(HSCs))、间充质干细胞(MSCs)和内皮祖细胞(EPCs))等。其中,造血干细胞和间充质干细胞在脐带血中含量较多。
造血干细胞可分化为所有类型的血细胞;间充质干细胞在一定条件下进行体外培养和诱导可以向神经、成骨、软骨、脂肪、肌腱、肌肉和心肌等细胞方向分化,两者均已广泛应用于临床干细胞移植研究。
然而,这个观点目前受到了挑战。的研究表明,组织特异性干细胞同样具有分化成其它细胞或组织的潜能,这为干细胞的应用开创了更广泛的空间。按分化潜能的大小,干细胞基本上可分为三种类型:一类是全能性干细胞,它具有形成完整个体的分化潜能。如胚胎干细胞,它是从早期胚胎内的细胞团分离出来的一种高度未分化的细胞系,具有与早期胚胎细胞相似的形态特征和很强的分化能力,它可以无限增殖并分化成为全身200多种细胞类型,进一步形成机体的组织、器官。另一类是多能性干细胞,这种干细胞具有分化出多种细胞组织的潜能,但却失去了发育成完整个体的能力,发育潜能受到一定的限制,骨髓多能造血干细胞是典型的例子,它可分化出至少十一中血细胞,但不分化出造血系统以外的其他细胞。还有一类干细胞为单能干细胞(也称专能、偏能干细胞),这类干细胞只能向一种类型或密切相关的两种类型的,如上皮组织基底层的干细胞、肌肉中的成肌细胞。
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1994年,通过体外授精和病人捐献的人胚泡处于2-原核期。胚泡内细胞群在培养中得以保存其周边有滋养层细胞聚集 ,ES样细胞位于。1998年美国有两个小组分别培养出了人的多能( pluripotent )干细胞: James A. Thomson在 Wisconsin大学领导的研究小组从人胚胎组织中培养出了干细胞株。他们使用的方法是:人卵体外受精后,将胚胎培育到囊胚阶段,提取 inner cell mass细胞,建立细胞株。经测试这些细胞株的细胞表面 marker 和酶活性,实他们就是全能干细胞。用这种方法,每个胚胎可取得15-20干细胞用于培养。 John D. Gearhart在 Johns Hopkins大学领导的另一个研究小组也从人胚胎组织中建立了干细胞株。他们的方法是:从受精后5-9周人工流产的胚胎中提取生殖母细胞( primordial germ cell )。由此培养的细胞株,实具有全能干细胞的特征。
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冷冻保护液的添加用 1640培养液将无菌的保护液 (DMS〇 )配 成 20 % 浓 度 ,取与胎肝悬液等体积的2 0 % D M S O , 缓慢加人细胞悬液中,室温静置 10min ,再将样品放入降温仪中。程序降温法:多采用两步或三步降温法,即 开 始 时 从 室 温 以 降 温 ,降至- 3 0 ℃时 ,恒 温 2m i n 后 改 为 5——7℃ /m i n 降至-80℃或- 9 0℃ , 再转入液氮中 ( - 1 9 6 ℃ ) 长期保存。也有人主张开始降温速度应严格控制在1-3℃ /min,但经过相变(-11—15℃)热释放之后即可加速降温速度,余下各阶段对细胞存活影响不大。
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