如何增加干细胞
脐血干细胞的保存 婴儿出生后，留在脐带及胎盘内的血就是脐带血。自古以来，这些血被当成废物丢弃，目前采集脐带血的方式是:婴儿出生后，脐带接扎，剪断，婴儿由助产护士、擦洗、包裹、护理的同时，既可从脐带血(体内采集)，也可待胎盘娩出后再采集(体外采集)。两种方法采集量均可在80ml 左右。
脐血采集不会对婴儿和母体造成任何不利影响，只是将原来作为废弃物的脐血收集下来。但应注意的一点是，采集后的脐血应于 24 小时之内进行处理，运送过程中应避免紫外线照射及剧烈震荡，以充分保持细胞的活性。保存者应在产前提前与医院及脐血库联络，以保证脐血的及时、顺利采集。
将 采 集 的 P B S C 用 R P M I 1 6 4 0 营养液调细胞浓度在 2 x l 0 7—— l x l 0 8 范围内，与等量预冷的冷冻保护液混匀，分别注入低温冷冻袋内，并留取检测样品注入冷冻管。将冷冻袋(管)放入已预冷至4℃程控降温仪内，程序化降温。 -l℃/min，降至-4〇 ℃，平 衡 3 min， -5℃ /min，降至-80℃ ，取出后放人液氮内(- 1 9 6℃)保存。存放时间为 5 年 。
如何增加干细胞
米 用 6 % (质量分数) 轻乙基淀粉(h e s ， 平均相对分子质量 480 000， H e s p a n ， D u p o n ,美国) 沉降后一次离心方法去除大多数红细胞及大部分血浆。具体方法:每份脐带血按体 积 比 1 : 4 的比例加入脐带血内，充 分 混 勻 ，垂 直 倒 置 悬 挂 ，使红细胞自然沉降20〜 3 0 m i n ， 直至红细胞界面下降时，去除红细胞。再将富含有核细胞的血裝在 1〇℃ 4 00g 离 心 l O m i n ， 沉降有核细胞。用血浆积压器去除部分血浆。体 积 为 30——40ml。以上操作均在采集袋中操作 。
如何增加干细胞
目前外周血造血干细胞体外保存主要有两种方法 : -196℃ 程控降温液氮冻存和- 8 0 ℃ 直接保存方法。其中前者以其能长期保存而且细胞损失少作为经典方法在国内外广泛应用(Almid 1997, Broxmeyer 1997)，但缺点是操作复杂，仪器设备昂贵。 - 8 0℃ 直接冻存的方法是从2 0 世 纪 8 0 年代发展起来的，其优点是操作简便，费用低而实用，但用该方法进行长期造血干细胞保存研究报告较少，故目前认为-80℃ 直接冻存适用于较短时间的造血干细胞冻存。冷冻保护液是影响冻存效果的关键之一。
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