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脐带血有哪些用途?
脐带血中的造血干细胞可以用来治疗多种血液系统疾病和免疫系统疾病,包括血液系统恶性肿瘤(如急性白血病、慢性白血病、多发性骨髓瘤、淋巴瘤等)、骨髓增殖异常综合征、血红蛋白病(如海洋性贫血)、骨髓造血功能衰竭(如再生障碍性贫血)、先天性代谢性疾病、先天性免疫缺陷疾患、自身免疫性疾患、某些实体肿瘤(如小细胞肺癌、神经母细胞瘤、卵巢癌等)。
胎肝细胞悬液的制备人胎肝取至水囊引产或剖腹产的4〜6个月正常胎儿。在无菌条件下从腹腔取出胎肝,同时从心脏取血查胎儿血型。剔除粘连在肝脏表面的结缔组织和胆囊后,将肝脏置于培养皿中剪成小组织块,然后投入装有双层不锈钢(内层孔径为 1 0 0 目,外 层 为 1 8 0 目/in2(lin2=6.451600xl0-4 m 2))的小烧杯。用少量培养液或生理盐水(经细胞培养,热原试验均为阴性),将组织块冲洗2〜 3 次 ,弃去洗涤液,然后倒入20 ml P R M I 1640培养液,并用注射器针芯在钢网内将组织块研磨,如此 重 复 3 次 ,即可取出胎肝中大部分的造血干细胞。将合并收集的细胞悬液通过4 号的注射器制成单细胞悬液。
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1994年,通过体外授精和病人捐献的人胚泡处于2-原核期。胚泡内细胞群在培养中得以保存其周边有滋养层细胞聚集 ,ES样细胞位于。1998年美国有两个小组分别培养出了人的多能( pluripotent )干细胞: James A. Thomson在 Wisconsin大学领导的研究小组从人胚胎组织中培养出了干细胞株。他们使用的方法是:人卵体外受精后,将胚胎培育到囊胚阶段,提取 inner cell mass细胞,建立细胞株。经测试这些细胞株的细胞表面 marker 和酶活性,实他们就是全能干细胞。用这种方法,每个胚胎可取得15-20干细胞用于培养。 John D. Gearhart在 Johns Hopkins大学领导的另一个研究小组也从人胚胎组织中建立了干细胞株。他们的方法是:从受精后5-9周人工流产的胚胎中提取生殖母细胞( primordial germ cell )。由此培养的细胞株,实具有全能干细胞的特征。
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临床冻存 P B S C 常采 用 0.5xl08—— 1.0xl08个/ m l 的细胞浓度。McElwain、 Mangalik、 Bumett等分别将骨髓造血干细胞在 4°C保 存 8 h 、 72 h 和 48 h后进行回输,并取得了成功。非 低 温 4 ¾ 保 存 P B S C , 简化了移植过程,无需加入冷冻保护 液 ,避免冻存过程对细胞的损害,仅需要骨髓保养液,可减少回输时的毒副作用;减少 P B S C 在体外污染的机会;有利于造血重建。因此它是一种简便可行,,经济有效的体外保存方法。缺点是保存时间较短,不 宜 超 过 72 h ,当预处理方案为3〜 4 天
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