间充质干细胞单价
干细胞按能力可以分为以下四类:
1.全能干细胞
由卵和精细胞的融合产生受精卵。而受精卵在形成胚胎过程中四细胞期之前任一细胞皆是全能干细胞。具有发展成独立个体的能力。也就是说能发展成一个个体的细胞就称为全能干细胞。
2.万能干细胞
是全能干细胞的后裔,无法发育成一个个体,但具有可以发育成多种组织的能力的细胞。
3.多能干细胞
只能分化成特定组织或器官等特定族群的细胞(例如血细胞,包括红血细胞、白血细胞和血小板)。
4.专一性干细胞
只能产生一种细胞类型;但是,具有自更新属性,将其与非干细胞区分开。
冷冻保护液的添加用 1640培养液将无菌的保护液 (DMS〇 )配 成 20 % 浓 度 ,取与胎肝悬液等体积的2 0 % D M S O , 缓慢加人细胞悬液中,室温静置 10min ,再将样品放入降温仪中。程序降温法:多采用两步或三步降温法,即 开 始 时 从 室 温 以 降 温 ,降至- 3 0 ℃时 ,恒 温 2m i n 后 改 为 5——7℃ /m i n 降至-80℃或- 9 0℃ , 再转入液氮中 ( - 1 9 6 ℃ ) 长期保存。也有人主张开始降温速度应严格控制在1-3℃ /min,但经过相变(-11—15℃)热释放之后即可加速降温速度,余下各阶段对细胞存活影响不大。
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目前干细胞存储的设备为液氮罐,主要为液相和气相两种,存储温度设定在-150℃至-196℃之间,确保干细胞的质量。相较于液相液氮罐,气相液氮罐具有样本间的交叉污染、降低样本爆管的风险、损耗低等优势,当前大多数存储机构都选择气相液氮罐存储。存多久——干细胞存储期限理论来讲,干细胞可以长期存储,不会低于人体的寿命。干细胞存储在液氮环境下,细胞处于休眠状态,而且细胞内的生命活动接近停止,可无限期存储。当前自体存储期限一般分为5年、10年、15年、20年等。
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胎肝细胞悬液的制备人胎肝取至水囊引产或剖腹产的4〜6个月正常胎儿。在无菌条件下从腹腔取出胎肝,同时从心脏取血查胎儿血型。剔除粘连在肝脏表面的结缔组织和胆囊后,将肝脏置于培养皿中剪成小组织块,然后投入装有双层不锈钢(内层孔径为 1 0 0 目,外 层 为 1 8 0 目/in2(lin2=6.451600xl0-4 m 2))的小烧杯。用少量培养液或生理盐水(经细胞培养,热原试验均为阴性),将组织块冲洗2〜 3 次 ,弃去洗涤液,然后倒入20 ml P R M I 1640培养液,并用注射器针芯在钢网内将组织块研磨,如此 重 复 3 次 ,即可取出胎肝中大部分的造血干细胞。将合并收集的细胞悬液通过4 号的注射器制成单细胞悬液。
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