浙江神雁精准医疗科技有限公司=西部生科健康医学干细胞
干细胞按能力可以分为以下四类:
1.全能干细胞
由卵和精细胞的融合产生受精卵。而受精卵在形成胚胎过程中四细胞期之前任一细胞皆是全能干细胞。具有发展成独立个体的能力。也就是说能发展成一个个体的细胞就称为全能干细胞。
2.万能干细胞
是全能干细胞的后裔,无法发育成一个个体,但具有可以发育成多种组织的能力的细胞。
3.多能干细胞
只能分化成特定组织或器官等特定族群的细胞(例如血细胞,包括红血细胞、白血细胞和血小板)。
4.专一性干细胞
只能产生一种细胞类型;但是,具有自更新属性,将其与非干细胞区分开。
冷冻保护液的添加用 1640培养液将无菌的保护液 (DMS〇 )配 成 20 % 浓 度 ,取与胎肝悬液等体积的2 0 % D M S O , 缓慢加人细胞悬液中,室温静置 10min ,再将样品放入降温仪中。程序降温法:多采用两步或三步降温法,即 开 始 时 从 室 温 以 降 温 ,降至- 3 0 ℃时 ,恒 温 2m i n 后 改 为 5——7℃ /m i n 降至-80℃或- 9 0℃ , 再转入液氮中 ( - 1 9 6 ℃ ) 长期保存。也有人主张开始降温速度应严格控制在1-3℃ /min,但经过相变(-11—15℃)热释放之后即可加速降温速度,余下各阶段对细胞存活影响不大。
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除内源性调控外,干细胞的分化还可受到其周围组织及细胞外基质等外源性因素的影响。 分泌因子 间质细胞能够分泌许多因子,维持干细胞的增殖,分化和存活。有两类因子在不同组织甚至不同种属中 成体干细胞在体内发育为不同组织都发挥重要作用,它们是TGFβ家族和Wnt信号通路。比如TGF家族中至少有两个成员能够调节神经嵴干细胞的分化。近研究发现,胶质细胞衍生的神经营养因子(GDNF)不仅能够促进多种神经元的存活和分化,还对精原细胞的再生和分化有决定作用。GDNF缺失的小鼠表现为干细胞数量的减少,而GDNF的过度表达导致未分化的精原细胞的累积[3]。Wnts的作用机制是通过阻止β-Catenin分解从而Tcf/Lef介导的转录,促进干细胞的分化。比如在线虫卵裂球的分裂中,邻近细胞导的Wnt信号通路能够控制纺锤体的起始和内胚层的分化。 膜蛋白介导的细胞间的相互作用 有些信号是通过细胞-细胞的直接接触起作用的。β-Catenin就是一种介导细胞粘附连接的结构成分。除此之外,穿膜蛋白Notch及其配体Delta或Jagged也对干有重要影响。在果蝇的感觉器官前体细胞,脊椎动物的胚胎及成年组织包括视网膜神经上皮、骨骼肌和血液系统中,Notch信号都起着重要的作用。当Notch与其配体结合时,干细胞进行非分化性增殖;当Notch活性被抑制时,干细胞进入分化程序,发育为功能细胞。 整合素(Integrin)与细胞外基质 整合素家族是介导干细胞与细胞外基质粘附的主要的分子。整合素与其配体的相互作用为干细胞的非分化增殖提供了适当的微环境。比如当β1整合素丧失功能时,上皮干细胞逃脱了微环境的制约,分化成角质细胞。此外细胞外基质通过调节β1整合素的表达和,从而影响干细胞的分布和分化方向。
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胎肝细胞悬液的制备人胎肝取至水囊引产或剖腹产的4〜6个月正常胎儿。在无菌条件下从腹腔取出胎肝,同时从心脏取血查胎儿血型。剔除粘连在肝脏表面的结缔组织和胆囊后,将肝脏置于培养皿中剪成小组织块,然后投入装有双层不锈钢(内层孔径为 1 0 0 目,外 层 为 1 8 0 目/in2(lin2=6.451600xl0-4 m 2))的小烧杯。用少量培养液或生理盐水(经细胞培养,热原试验均为阴性),将组织块冲洗2〜 3 次 ,弃去洗涤液,然后倒入20 ml P R M I 1640培养液,并用注射器针芯在钢网内将组织块研磨,如此 重 复 3 次 ,即可取出胎肝中大部分的造血干细胞。将合并收集的细胞悬液通过4 号的注射器制成单细胞悬液。
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